웨스턴 블롯을 하고 나서 ECL로 현상

Question

웨스턴 블롯을 하고난 후 transfer된 membrane에 ECL solution을 뿌리고 암실에서 film에 현상할 때 적색등에는 film이 타지 않는 이유는?

고혹적인가마우지34 · Accepted Answer

적색등 또는 빨간색 조명 아래에서는 chemiluminescent 현상이 일어나지 않아서 필름이 타지 않습니다. Chemiluminescence는 화학 반응에 의해 빛이 방출되는 현상을 말합니다. ECL(Electrochemiluminescence) solution은 특정 효소와 반응하여 빛을 방출하는 화학 반응을 포함하고 있습니다.ECL solution을 사용하여 western blot에서 transfer된 membrane에 현상을 할 때, ECL solution은 효소와의 반응에 의해 빛을 방출합니다. 이때, 적색등 아래에서는 보통 다른 파장의 빛이 사용되므로, chemiluminescent 현상이 일어나지 않습니다. 적색등은 낮은 에너지의 빛을 방출하여 반응을 유발시키지 않기 때문입니다.실제로 western blotting 실험에서는 일반적으로 film이 노출되는 단계에서 보통 적색등과 같은 약한 빛을 사용하여 실험실의 밝기를 낮추고 반응을 노출합니다. 이렇게 함으로써 ECL solution과 효소의 반응으로 발생하는 빛만을 더 잘 관찰하고 기록할 수 있습니다. 높은 에너지의 빛을 사용할 경우, ECL 반응뿐만 아니라 기타 불필요한 빛들로 인해 필름이 타거나 반응이 방해될 수 있기 때문입니다.

전기·전자

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