SDS-PAGE에 대해 알려주세요!
SDS_PAGE라는 실험이 어떤실험인지, 또 실험의 프로토콜은 어떻게되는지 궁금합니다.
실험에 필요한 준비물도 알려주시면 감사하겠습니다~
2개의 답변이 있어요!안녕하세요. 김철승 과학전문가입니다.
SDS-PAGE는 단백질을 분리하고
크기를 결정하기 위한 실험 방법입니다.
SDS는 계면활성제로서 단백질에
음전하를 부여하고
PAGE는 폴리아크릴아마이드 겔을
기반으로 한 전기영동 기법입니다.
이런 방식으로 단백질을 분자량에
따라 분리할 수 있습니다.
단백질 샘플을 취해서 SDS 함유 샘플 버퍼와
혼합하고 가열하여 단백질을 불용성 복합체로 전환합니다.
이 과정으로 모든 단백질은 유사한 전하/질량 비를
가지게 되어 크기에 따라 분리가 가능해집니다.
분리할 단백질의 크기에 따라 적절한 농도의
아크릴아마이드/비스아크릴아마이드 용액을
준비하여 겔을 만듭니다.
확고하게 형성된 겔에 샘플을
주입한 후 겔 탱크를 버퍼로 채웁니다.
전기장을 겔에 가해 단백질이 음
전하를 띠고 있기 때문에 양극(+)으로
이동하도록 합니다.
작은 단백질이 더 빨리 이동합니다.
전기영동 후 겔을 코마시 블루나 실버 스테인과 같은
염색제로 염색하여 단백질 밴드를 드러냅니다.
염색된 겔을 이미징 장치를 이용해
분석하고 분자량 마커와 비교하여 단백질의
크기를 추정합니다.
실험에 필요한 물품
- 단백질 샘플
- SDS 함유 샘플 버퍼 (일반적으로 트리스-HCl SDS 글리세롤 염료 그리고 DTT 또는 베타-메르카프토에탄올 포함)
- 폴리아크릴아마이드 및 비스아크릴아마이드 용액 (겔 형성에 사용)
- Tris SDS 글리신으로 구성된 전기영동 버퍼
- 분자량 마커 (단백질의 크기를 추정하기 위해)
- 염색 및 탈색 솔루션
- 전기영동 장비 (겔 탱크 전원 공급 장치)
- 마이크로파이펫 팁 그리고 기타 실험실 기기들
- 겔 캐스팅 장비 및 겔 캐스팅 트레이
- 피펫과 피펫 팁
- 이미징 장치 (UV 또는 LED 조명 장치와 함께 CCD 카메라)
SDS-PAGE는 매우 정교한 실험으로 정확하고 일관된
결과를 얻기 위해서는 세밀한 주의가 필요합니다.
회화적인 프로토콜 및 최적화된 조건은 실험실의
특정 요구에 따라 다양한 변수를 조절할 필요가
있습니다.
답변이 마음에 드셨다면 좋아요와 추천을 부탁드립니다.
안녕하세요! 손성민 과학전문가입니다.
SDS-PAGE는 단백질 분석을 위한 실험 방법 중 하나로 단백질의 분자량을 측정하는 데 사용됩니다. 이 실험은 단백질을 전기적으로 이동시켜 분리하는 전기영동 방법을 기반으로 합니다.
실험의 프로토콜은 다음과 같습니다. 먼저 실험에 사용할 샘플을 준비합니다. 이때 샘플은 SDS와 함께 열처리되어야 합니다. 그 다음 샘플을 겔에 적재하고 전기를 흘려 단백질을 분리합니다. 분리된 단백질은 염색을 통해 시각적으로 확인할 수 있습니다. 분리된 단백질의 이동 거리를 측정하여 분자량을 계산합니다.
실험에 필요한 준비물은 겔 전기영동 장비 염색약 등이 있습니다. 그리고 샘플을 열처리하기 위해 열기기도 필요합니다. 이 외에도 실험에 따라 다양한 장비와 시약이 필요할 수 있으니 실험 프로토콜을 참고하시면 됩니다.
SDS-PAGE는 단백질 분석에 매우 유용한 실험 방법이며 다양한 분야에서 활용되고 있습니다. 실험을 진행할 때는 안전에 주의하시고 실험 프로토콜을 정확히 따르시면 좋은 결과를 얻으실 수 있을 것입니다. 감사합니다.
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