Phage elisa protocol을 알려주세요
제목그대로 질문입니다. phage elisa 실험의 프로토콜이 궁금합니다. 일반적으로 진행하는 elisa실험과의 차이점이나 특이사항이 있다면 함께 설명부탁드립니다.
안녕하세요. 전기기사 취득 후 현업에서 일하고 있는 4년차 전기 엔지니어입니다.
Phage ELISA는 일반적인 ELISA와 유사하지만 파지 디스플레이로 선택된 파지들을 감지하는 데 초점이 맞춰져 있습니다. 보통 파지 ELISA에서는 먼저 파지가 코팅된 플레이트 웰에 항체를 적용하고, 그 후 결합되지 않은 항체를 세척합니다. 이후 HRP 또는 ALP와 같은 효소가 연결된 2차 항체를 첨가하고, 반응 후 기질을 추가하여 발색을 통해 결합된 항체의 양을 측정합니다. 일반적인 ELISA와의 차이점은 파지를 표적으로 하여 실험을 진행한다는 점이며, 파지의 농도 조절, 세척 조건 등이 다를 수 있습니다. 따라서 사용하려는 파지의 특성에 따라 프로토콜을 세부적으로 조절하는 것이 중요합니다.
안녕하세요. 전기전자 분야 전문가입니다.
Phage ELISA는 파지를 사용하여 항원-항체 상호작용을 분석하는 실험으로 일반적인 ELISA와 유사합니다. 샘플에 파지가 코팅된 후, 항원과의 결합 여부를 확인하기 위해 항체를 추가합니다. 일반적인 ELISA와의 차이점은 파지가 사용된다는 점이며, 파지의 결합 특성을 감안해 실험 조건을 최적화해야 할 수 있습니다. 정확한 프로토콜은 사용하려는 키트나 연구 목적에 따라 다를 수 있으니, 해당 키트 제조사나 관련 논문을 참조하시기 바랍니다.
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안녕하세요
Phage ELISA는 특정 단백질에 대한 파지의 결합력을 평가하는 기술로, 일반 ELISA와 유사하지만 몇 가지 주요 차이점이 있습니다. 먼저 항원 코팅 단계에서 항체 대신 타겟 단백질을 PBS 또는 탄산수소염 완충액에 용해시켜 ELISA 플레이트에 코팅합니다. 이후 코팅된 플레이트에 파지 용액을 첨가하고 인큐베이션하며, 파지 농도는 타겟 단백질과의 결합 친화도에 따라 조절합니다. 이어서 파지-단백질 복합체에 결합하는 1차 항체를 첨가하고 인큐베이션한 후, HRP 결합 2차 항체를 첨가합니다. 마지막으로 HRP 기질을 첨가해 발색 반응을 유도하고, TMB 또는 OPD와 같은 기질을 사용해 발색 반응을 광흡수도 측정기로 분광학적으로 측정합니다. 파지 농도가 높을수록 흡광도가 높아집니다. Phage ELISA는 직접 타겟 단백질을 코팅해 다양한 단백질에 적용 가능하며, 낮은 농도의 파지도 검출할 수 있는 높은 민감도를 가집니다. 다양한 파지 라이브러리를 활용해 단백질-단백질 상호작용 연구에 유용하며, 최적의 조건을 찾기 위해 예비 실험을 수행하는 것이 중요합니다
안녕하세요~!!
김철승 과학 전문가 예요~
Phase ELISA의 원리는 파지 디스플레이 라이브러리르 사용하고요
고유한 DNA염기 서열을 가지고 있어요
파지DNA염기서열은 특정단백을
만들수가있죠
ELIASA 실험은
타겟 단백질을 세포에서 추출하려고
세포를 파쇄해요
ELISA판에 타겟 단밸질에 대한 1차 항체를 바르고요.
파쇄된 세포용액을 ELISA판에 부어서
1차 항체가 타겟 단밸질하고 결합하도록 합니다.
나머지는 세척해서 치우고요.
그다음에는 바이오틴 결합 2차 항체와 반응시켜서
스트랩타비딘-HRP결합 2차 항체를
반응시켜요
그담에는
HRP기질을 첨가해서 발색반응을 일으키고요.
ELISA판 색깔 강도를 측정해서
타겟 단백질양을 측정해요
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